水产生物病害与防治rdquo专栏谷氨 [复制链接]

“水产生物病害与防治”专栏

为加强我国从事水产动物病害基础和应用研究的科研及技术人员的交流，促进我国水产动物病害研究和防治水平的提高，保障我国水产业的持续健康发展，本刊特开设“水产生物病害与防治”专栏，为广大水产科技工作者提供交流的平台。

题目

谷氨酰胺对斜带石斑鱼GF-1细胞中C-Myc蛋白的表达与神经坏死病毒复制的影响

作者

沈海洋1,2，卢志杰1,2，秦真东2，赵丽娟2，李亚男2，刘春2，杨光1,2，叶成凯1,2，潘淦1*，林蠡2*

单位

1.华南师范大学生命科学学院，广东省水产健康安全养殖重点实验室，广东广州；

2.仲恺农业工程学院动物科技学院，广东省水环境与水产品安全工程技术研究中心，广州市水产病害与水禽养殖重点实验室，广东广州

摘要

为探讨C-Myc表达、谷氨酰胺代谢和神经坏死病毒复制三者之间的关系，本研究首先克隆了斜带石斑鱼鳍条细胞(GF-1)中的C-Myc基因(GF-1-C-Myc)，结果显示GF-1-C-Myc基因cDNA全长bp，开放阅读框(ORF)为bp，编码95个氨基酸(aa)，有亮氨酸拉链结构域与螺旋－环－螺旋(HLH)结构域。实验表达和纯化了GF-1-C-Myc蛋白，并制备其多克隆抗体。采用实时定量PCR技术(qRT-PCR)与免疫印迹法(WB)检测了GF-1-C-Myc基因的表达和神经坏死病毒的复制。结果显示，缺乏谷氨酰胺会同时抑制GF-1-C-Myc基因的表达和神经坏死病毒(NNV)的复制，添加谷氨酰胺可同时促进GF-1-C-Myc的表达和NNV的复制；此外，NNV感染可上调GF-1-C-Myc基因的表达，并显著消耗GF-1细胞培养液中的谷氨酰胺。研究表明，GF-1-C-Myc基因可调控宿主谷氨酰胺代谢，从而有利于神经坏死病毒的复制。本结果为防控NNV的感染提供了参考。

关键词

斜带石斑鱼；C-Myc基因；GF-1细胞；神经坏死病毒；感染；谷氨酰胺

文中图片

斜带石斑鱼GF-1细胞C-Myc的ORF核苷酸序列及氨基酸序列

斜带石斑鱼与其他鱼类的C-Myc蛋白氨基酸序列比对和预测的三维结构图

斜带石斑鱼与其他鱼类C-Myc基因的系统进化树

C-Myc基因的克隆电泳图

斜带石斑鱼GF-1-C-Myc蛋白表达、纯化与多克隆抗体制备

GF-1-C-Myc多克隆抗体的最终效价分析

C-Myc基因在GF-1细胞不同感染时间下的mRNA与蛋白表达

不同条件下谷氨酰胺含量变化的测定

NNV在含有谷氨酰胺与不含谷氨酰胺培养基中的感染情况

NNV衣壳蛋白在不同感染时间点的表达

谷氨酰胺对GF-1细胞中C-Myc基因表达的影响

文章引用格式

沈海洋，卢志杰，秦真东，等.谷氨酰胺对斜带石斑鱼GF-1细胞中C-Myc蛋白的表达与神经坏死病毒复制的影响[J].水产学报.DOI:10./jfc..

ShenHY,LuZJ,QinZD,etal.RelationshipbetweentheexpressionofC-MycproteinandthereplicationofnervousnecrosisvirusinGF-1cellstreatedwithglutamine[J].JournaloffisheriesofChina.DOI:10./jfc..

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