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海藻糖在细胞冻存方面的应用研究1OP [复制链接]

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海藻糖是一种稳定的非还原性双糖,能够在高温、高寒、干燥失水等恶劣条件下在细胞表面形成特殊保护膜,有效保护保护生物大分子结构不被破坏,对生物细胞具有优异的非特异性保护功能,可提高生物细胞对恶劣条件的抗性。

近年来,海藻糖已广泛用于抗体药物等生物制剂领域。目前已上市的抗体类药物(含ADC)中,有30%左右选择海藻糖作为保护剂,包括Adcetris,Padcev,Imjudo,Kimmtrak等。

此外,在细胞冻存、辅助生殖等领域,海藻糖也发挥着愈发重要的作用。在此,艾伟拓产品团队与您一起解读几篇相关文献,了解相关研究进展。

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海藻糖用于少突胶质前体细胞(OPC)冻存

1.少突胶质前体细胞移植治疗脱髓鞘疾病

脱髓鞘疾病是以髓鞘缺失为主要特征的一类神经系统疾病,如脊髓损伤(SCI)、多发性硬化(MS)等。

少突胶质前体细胞(OPC)可在体内分化为成熟少突胶质细胞,后者是中枢神经系统重要的髓鞘形成细胞,包裹神经元轴突构成髓鞘结构。因此,少突胶质前体细胞(OPC)移植治疗脱髓鞘疾病被认为是极富潜力的治疗方法。

2.少突胶质前体细胞(OPC)现有冷冻保存方法及问题

为了实现人源OPC移植,OPC的冷冻保存就成为了非常关键的环节。

在进入临床使用前,人源OPC的冷冻保存主要使用年研究者提出的方法,即使用mL/L二甲基亚砜(DMSO)+mL/L胎牛血清(FBS),复苏活率为55%~70%。此后人源OPC的冷冻保存方法一直没有进行优化。

考虑到DMSO具有细胞毒性,以及胎牛血清(FBS)具有免疫原性,该冻存方法不适合临床使用。

为探究更加经济、有效、安全并可大规模应用的人源OPC冷冻保存方法,南方医科大学的刘畅等研究人员,使用人胚胎脑神经干细胞诱导的OPC,对其冻存方法进行了研究优化。

3.少突胶质前体细胞(OPC)冻存方法的优化

①比较了不同处理方法对OPC复苏活率的影响,发现消化法收集的细胞活率明显高于机械吹打法

②比较了不同冻存液在冻存盒慢速降温和液氮气相快速降温方法下OPC的复苏活率

其复苏活率结果如下所示,两种降温方法组间差异明显。快速降温法4组复苏活率均低于30%。在冻存盒慢速降温条件下,添加了海藻糖的冻存液E组复苏活率最高,达到(75.73±6.66)%。

③比较冷冻储存时间对OPC复苏活率的影响

选取复苏活率最高的含海藻糖冻存液E冻存细胞进行后续实验,比较短时程存储(<2个月)和长时程存储(6个月)的复苏活率,发现两组复苏活率差别无统计学意义。

④细胞增殖活性比较

选取复苏活率最高的含海藻糖冻存液E进行细胞增殖比较。冻存液E组和正常培养对照组同时同代数连续传代3次比较增殖倍数均值,发现两组差异无统计学意义。培养7天,正常培养组与复苏后培养组增殖率差异无统计学意义。说明用含海藻糖的冻存液冻存OPC后,细胞增殖活性较高,与非冻存细胞相当。

4.小结

该研究得出的结论是,使用消化法收集贴壁培养的OPC,加入配置的冻存液(70mL/LDMSO,mL/LFBS,0.2mol/mL海藻糖,OPS完全培养基)采用冻存盒慢速降温-快速复温的方式,可长期冷冻保存人胎脑神经干诱导的OPC,复苏活率平均可达75%,且冻存复苏不影响OPC特异性标志物表达及增殖能力。

海藻糖是一种来源广泛且无毒的双糖类非渗透性冻存保护剂,在人外周血干细胞(hPBSC)、hESC等多种细胞类型中已被验证有很好的冻存保护效果。本研究中,添加低浓度海藻糖的复合冻存液在所有实验组中得到最高的复苏活率,且培养后增殖及标志物表达结果均说明冻存液中添加一定量海藻糖,同样适用于人OPC冻存且有利于提高复苏活率。

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